蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒-蔗糖合成酶(SS)试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-5028 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-5027 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 50 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 2.5 mL×1

-20℃保存

试剂二

粉剂 10 mg×1

2-8℃保存

试剂三

液体 2 mL×1

2-8℃保存

试剂四

液体 25 mL×1

2-8℃保存

试剂五

液体 6 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

试剂二:临用前加 1 mL 水,配制成 10 mg/mL 蔗糖溶液,再将其用蒸馏水稀释为 500μg/mL 备用。

 

产品说明:

蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。SS(EC 2.4.1.13)催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。

SS 催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰。

 

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。

2 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

10

10

 

 

蒸馏水

 

45

45

55

试剂一

45

 

 

 


试剂二

 

 

10

 

混匀,25℃准确水浴10min

试剂三

15

15

15

15

沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却

试剂四

210

210

210

210

试剂五

60

60

60

60

混匀,80℃水浴保温 20min,冷却后,12000rpm 常温离心 10min。吸取 200μL 上清液于微量玻璃比色皿或者96 孔板中,在 480nm 下测定各管吸光值(标准管和空白管只做 1-2 管,每个测定管需要设定一个对照管)。计算ΔA 测=A 测定管-A 对照管,ΔA 标=A 标准管-A 空白管。

三、SS 活力单位的计算

1. 按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性(U/mg prot)=(C标准管×V1× ΔA测÷ΔA标)÷(V1×Cpr)÷T=50× ΔA测÷ΔA标÷Cpr

2. 按照样本质量计算

单位定义:每 g 组织每分钟催化产生1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性(U/g 质量)=(C标准管×V1× ΔA测÷ΔA标)÷(W×V1÷V2)÷T=50× ΔA测÷ΔA标÷W

C标准管:标准管浓度,500µg/mL ;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间,10min。

注意事项:

尽量在30min内完成测定。


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