产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称
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规格
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保存条件
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试剂一
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液体 120 mL×1 瓶
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4℃保存
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试剂二
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液体 6 mL×1 瓶
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常温保存
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试剂三
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液体 10 mL×1 瓶
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4℃保存
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标准品
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液体 59.3 μL×1 支
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4℃保存
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溶液的配制：
标准品：临用前加入 1.435 mL 无水乙醇配成 125 µmol/mL 的油酸标准溶液，充分溶解。用前注意解冻溶解。
产品说明：
LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/酶标板（非聚苯乙烯材质）、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织样本：称取约 0.1g 样本，加试剂一 1.0mL 充分研磨，于 4℃，15000rpm 离心 30min，取上清液待测。血清样本：直接检测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。
2、 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。
3、 标准溶液的稀释：将125µmol/mL的油酸标准溶液用乙醇稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9µmol/mL的标准溶液待测。
4、 操作表：
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加入试剂（mL）
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空白管
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测定管
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标准管
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试剂一
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0.15
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0.15
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0.15
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试剂二
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0.05
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0.05
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0.05
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反复震荡混匀
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蒸馏水
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0.08
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上清液/血清
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0.08
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标准溶液
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0.08
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迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10 min
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甲苯
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0.4
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0.4
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0.4
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反复震荡混匀后，室温4000rpm离心10 min
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取出离心管，小心吸取上层溶液0.3 mL，加入另一2 mL塑料离心管中，按下表操作
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试剂三
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0.075
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0.075
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0.075
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反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10 min，小心吸取上层溶液 0.2mL，加入微量玻璃比色皿/酶标板中，于 710nm处测定吸光值。记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管，计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
三、LPS活性计算
1、标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程，得到x（µmol/mL）。
2、酶活计算：
（1） 按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mg prot) =x×V样÷（Cpr×V样) ÷T= 0.1×x÷Cpr
（2） 按样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/g 质量) =x×V样÷（W×V样÷V提) ÷T= 0.1×x÷W
（3） 按血清计算
活性单位定义：37℃中每mL血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x
V样：加入反应体系中上清液体积，0.08mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；T：催化反应时间，10min；W：样本质量，g；V提：提取液体积，1mL。
注意事项：
1、 甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、 实验过程中须远离火源。
3、 当吸光度大于1时，建议将样本稀释后测量。
4、 如果用酶标板进行试验，建议选用非聚苯乙烯材质的96孔板。
生化检测
液相（HPLC）检测
