吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒-吲哚乙酸氧化酶试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4306 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4305 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

2-8℃保存

试剂一

粉剂×1

2-8℃保存

试剂二

粉剂×2

2-8℃保存

试剂三

粉剂×1

-20℃保存

试剂四

液体 30 mL×1

2-8℃保存

试剂五

粉剂×1

2-8℃保存

标准品

粉剂×1

-20℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前加入 5 mL 蒸馏水备用,2-8℃保存两周。

2 试剂二:临用前取 1 瓶加入 3 mL 蒸馏水备用,2-8℃保存一周(1 瓶粉剂溶解后可做 100T,为了延长使用时间,此产品多给 1 瓶粉剂)。

3 试剂三:临用前加入 5.71 mL 50%乙醇(乙醇VH2OV=11溶解备用。可以-20分装保存两周,避免反复冻融。

4 试剂五:临用前加入 15 mL 试剂四溶解备用,2-8℃保存两周。

5 标准品:10 mg 吲哚乙酸。临用前加入 1.14 mL 50%乙醇乙醇VH2OV=11溶解制成 50 μmol/mL的标准溶液,-20℃分装保存两周,避免反复冻融。

产品说明:

吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的   的水平,从而影响植物的生长。

IAA在无机酸条件下与FeCl3作用生成红色产物,在530nm下有*大吸收峰。酶活力的大小可用消耗IAA的速率表示。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。

2、细胞或细菌样本的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。12000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 可见分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至530nm,分光光度计蒸馏水调零。

2 标准液的稀释:将标准溶液用蒸馏水稀释为0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 μmol/mL的标准液。

三、吲哚乙酸氧化酶酶活计算

1、标准曲线的绘制:

以标准液的浓度(μmol/mL)为x轴,对应的ΔA标准为y轴绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方   程中计算得到样本浓度(x,μmol/mL)。

2、吲哚乙酸氧化酶活力计算:

       (1) 按蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol IAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活(U/mg prot)=x×V酶促×1000÷(V样×Cpr)÷T=333×x÷Cpr

(2) 按样本质量计算:

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol IAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活(U/g 质量)=x×V酶促×1000÷(W÷V提取×V样)÷T=333×x÷W

(3) 按细胞或细菌数量计算:

单位的定义:每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟消耗1nmol IAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活(U/104 cell)=x×V酶促×1000÷(500÷V提取×V样)÷T=0.667×x

V酶促:酶促反应总体积,0.08mL;1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol;V样:加入的样本体积,0.008mL Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL;500:500万个细胞;T:反应时间, 30min。

注意事项:

1、当ΔA大于0.4或者A对照管大于1时,建议将样本用提取液稀释后进行测定;ΔA过小时,可增加酶促反应时间(1h或2h)或增加加入的样本体积来测定。注意同步修改计算公式。

2、试剂一溶解变黑后则不能使用;试剂二有毒性,做好防护措施。


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